猴可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)酶联免疫(ELISA)试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用，不得用于临床诊断 规格：48T/96T
实验目的：
本试剂盒用于测定猴血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猴可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)水平。用纯化的猴可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)，再与HRP标记的可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猴可溶性转铁蛋白受体1(sTfR-1)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：20 nmol/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：10 、5 、2.5 、1.25 、0.625 nmol/L.
样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量1g，加入9ml的PBS、PH7.4，匀浆的比例1:9，匀浆液选取PBS（PH=7.2-7.4，浓度为0.01mol/L）。离心20分钟左右（3000-5000转/分），仔细收集上清。
6.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需自备的仪器耗材：
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
操作步骤：
1、加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50μl不同浓度的标准品，空白孔设定1个孔加入50μl蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6、温育：操作同2。
7、洗涤：操作同4。
8、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.98以上。
2. 批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。
检测范围：
0.15 nmol/L – 12 nmol/L
灵敏度：
最低检测浓度小于0.1 nmol/L
保存条件及有效期：
1. 试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期： 6个月
武汉赛拓森生物科技有限公司
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